一起來了解一下質(zhì)粒的提取方法是什么吧

　　質(zhì)粒(Plasmid)是附加到細(xì)胞中的非細(xì)胞的染色體或核區(qū)DNA原有的能夠自主復(fù)制的較小的DNA分子(即細(xì)胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質(zhì)粒雖然都是環(huán)狀構(gòu)型，它存在于許多細(xì)菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的葉綠體和線粒體等胞器中。
 

　　了解一下質(zhì)粒的提取方法
 

　　從細(xì)菌中分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個基本步驟:培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴增;收集和裂解細(xì)胞;分離和純化質(zhì)粒DNA。采用強堿液、加熱或溶菌酶(主要針對革蘭氏陽性細(xì)菌)可以破壞菌體細(xì)胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100(一般很少使用)可使細(xì)胞膜裂解。
 

　　經(jīng)溶菌酶和SDS或Triton X-100處理后，細(xì)菌染色體DNA會纏繞附著在細(xì)胞碎片上，同時由于細(xì)菌染色體DNA比質(zhì)粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。
 

　　當(dāng)用強熱或酸、堿處理時，細(xì)菌的線性染色體DNA變性，而共價閉合環(huán)狀DNA(Covalently closed circularDNA，簡稱cccDNA)的兩條鏈不會相互分開，當(dāng)外界條件恢復(fù)正常時，線狀染色體DNA段難以復(fù)性，而是與變性的蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片纏繞在一起，而質(zhì)粒DNA雙鏈又恢復(fù)原狀，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解狀態(tài)存在于液相中。
 

　　在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)，共價閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。在提取質(zhì)粒過程中，除了超螺旋DNA外，還會產(chǎn)生其它形式的質(zhì)粒DNA。
 

　　如果質(zhì)粒DNA兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂，分子就能旋轉(zhuǎn)而消除鏈的張力，形成松弛型的環(huán)狀分子，稱開環(huán)DNA(Open circularDNA，簡稱ocDNA);如果質(zhì)粒DNA的兩條鏈在同一處斷裂，則形成線狀DNA(LinearDNA)。當(dāng)提取的質(zhì)粒DNA電泳時，同一質(zhì)粒DNA其超螺旋形式的泳動速度要比開環(huán)和線狀分子的泳動速度快。